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紫外吸收法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的基本原理及優(yōu)缺點(diǎn)

 更新時(shí)間:2022-06-29 點(diǎn)擊量:13751

原理:蛋白質(zhì)分子中常含有酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等苯環(huán)結(jié)構(gòu),在紫外280nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰,其光吸收值與蛋白質(zhì)濃度成正比,故可以用280nm波長(zhǎng)吸收值大小來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)含量。
優(yōu)點(diǎn):
1.快速;
2.對(duì)蛋白質(zhì)無(wú)破壞性。
缺點(diǎn):
1.不是嚴(yán)格的定量方法。因?yàn)榇朔ㄊ歉鶕?jù)酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)殘基的強(qiáng)吸收值來(lái)測(cè)定的,不同的蛋白質(zhì)具有不同的消光系數(shù)。另外,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)分子中不含Tyr、Phe或Trp殘基時(shí),該方法就不能檢出蛋白。(此法用于測(cè)粗提總蛋白濃度較為適宜)
2.核酸可引起強(qiáng)烈干擾。


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